Nejat İşler tiyatroya lise yıllarında başlamıştır. Okul hayatından sonra ufak tefek alım-satım işlerine giren İşler, Yıldız Teknik Üniversitesi Fotoğraf bölümünü kazanmasına rağmen okula gitmez ve askerliğini yapıp İstanbul’a geri döner. 1991 senesinde Mimar Sinan Üniversitesi, Konservatuar Bölümüne girdi. 1995 senesinde mezun oluncaya kadar devlet tiyatrosunda ve televizyon dizilerinde rol aldı. Aynı dönemde Teşvikiye’de CD ve kitap sattığı işporta tezgahını işletti. Mezuniyetinden sonra arkadaşlarıyla tiyatro kuran İşler; "Gurur", "Deli Yürek", "Şehnaz Tango", "Nasıl Evde Kaldım", "Dedem", "Gofret ve Ben", "Aşk ve Gurur", "Şeytan Ayrıntıda Gizlidir", "Gülbeyaz" ve "Aliye" adlı diziler rol aldı. 1999 senesinde "Eylül Fırtınası" adlı filmde ilk kez sinema ekranlarında yer aldı. Türkiye’de sinema ve televizyon dizilerinin en popüler isimlerinden biri olan Nejat İşler, 2014 senesinin Ocak ayında Bodrum’da geçirdiği bir rahatsızlık sonrası, İstanbul’da uzun bir tedavi süreci geçirdi. Bu süreçte oyunculuğa ara vererek tedavisi sonrası yakın zamanda yerleştiği Bodrum’a geri döndü. 2014 senesine Nuri Bilge Ceylan'ın yönetmenliğini yaptığı "Kış Uykusu" filminde, 2016 yılında da başrolünü Serenay Sarıkaya ile paylaştığı "İkimizin Yerine" adlı filmde rol almıştır.