Lupita Nyong’o Kenyalı anne tarafından Meksika'da doğdu ve Kenya'da büyüdü. Hampshire College Sinema ve Tiyatro Çalışmalarında lisans elde ederek ABD'de üniversiteye gitti. 2008 yılında kısa film olan "East River" adlı yapımda rol aldı. "Shuga" (2009) adlı TV dizisinde bir yıldız olarak Kenya'ya döndü. Ayrıca 2009 yılında kendisinin yazdığı "My Genler" isimli belgeseli yönetti. Nyong'o, Yale Drama Okulu'ndan oyunculuk alanında yüksek lisansını sürdürmeye devam etti. Buradan mezun olduktan sonra, Steve McQueen'in tarihsel-drama filmi olan "12 Yıllık Esaret" adlı yapımda "Patsey" karakterini canlandırdığı ilk uzun metrajlı filmde rol aldı. Bu filmde En İyi Yardımcı Kadın Oyuncu Akademi Ödülünü kazandı. Böylece ilk Kenyalı oyuncu ve Akademi Ödülü kazanan ilk Meksikalı aktris oldu. Ayrıca En İyi Kadın Oyuncu Tony Ödülüne sahiptir.